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Part3——Denovo FCS Express6 試用版使用指南-入門篇(中)

作者:admin信息來源:達(dá)科為日期:2017年12月11日打印字體:  
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      大家對(duì)小達(dá)君上周介紹的Denovo FCS Express6的入門篇(上)是否還有印象?今天,小達(dá)君給大家介紹軟件的入門知識(shí)中篇,請(qǐng)結(jié)合入門篇上篇學(xué)習(xí)喲。

    

       在入門篇上篇中,我們分享了軟件的版面知識(shí),數(shù)據(jù)的添加,圈門,座標(biāo)軸標(biāo)簽的改動(dòng)等功能,那么本期將給將給大家介紹補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)及應(yīng)用,包括手動(dòng)調(diào)補(bǔ)償及自動(dòng)調(diào)補(bǔ)償,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)及一些實(shí)用的小技巧。

1. 手動(dòng)脫機(jī)調(diào)補(bǔ)償及自動(dòng)調(diào)補(bǔ)償

A. 手動(dòng)調(diào)補(bǔ)償(一般在僅有樣本管或者自動(dòng)調(diào)補(bǔ)償后微調(diào)時(shí)使用)

打開軟件,插入一個(gè)數(shù)據(jù)(示例中為彩點(diǎn)圖),當(dāng)插入一個(gè)圖形后,如需更換數(shù)據(jù)的顯示方式,如想將彩點(diǎn)圖更換為其它圖形(如密度圖等),可選中該圖形,直接按照下述步驟更改。

圈中目的細(xì)胞群,拖至空白處形成一個(gè)新的圖形,并根據(jù)需要改動(dòng)橫縱坐標(biāo)軸的參數(shù)。本示例中以FITC和PE為例,調(diào)節(jié)此兩通道之間的補(bǔ)償。下圖所示,補(bǔ)償未經(jīng)過調(diào)節(jié),F(xiàn)ITC與PE之間有補(bǔ)償。


此時(shí)可以手動(dòng)調(diào)節(jié)兩通道之間的補(bǔ)償,該數(shù)據(jù)為FITC單管,可用PE-FITC調(diào)節(jié)FITC滲漏到PE通道去的熒光。步驟如下圖所示:

出現(xiàn)補(bǔ)償編輯欄,從PE通道中去除FITC的熒光信號(hào),使PE通道的Mean/Median值與陰性細(xì)胞群一致。

點(diǎn)擊OK,則FITC滲漏到PE通道的熒光被扣除。

B. 自動(dòng)調(diào)補(bǔ)償(需要陰性管及各單陽管)

    打開軟件,按照下述步驟操作。


建立直方圖后,在原本的版面Page 1后面出現(xiàn)Scatter Plot及其它各個(gè)單管的Control界面。


接著,在Scatter Plot版面中,將門的位置移至正確的細(xì)胞群所在的位置,如下圖所示。


如所示的方形門不能正確的圈出細(xì)胞群,可按以下步驟將該門改變?yōu)樽杂尚伍T等。


圈好門之后,選中單管Control版面,按照陰性細(xì)胞與陽性細(xì)胞的位置調(diào)整Marker門的位置。


依次調(diào)整好各單管Control的Marker門的位置。此處不一一列舉。回到補(bǔ)償界面。此處的3、4適用于使用補(bǔ)償beads調(diào)節(jié)補(bǔ)償?shù)那闆r(由于本次數(shù)據(jù)為細(xì)胞,此處不詳細(xì)列出,如對(duì)此步驟感興趣,可咨詢小達(dá)君)


則自動(dòng)調(diào)補(bǔ)償就完成了。補(bǔ)償矩陣及溢出矩陣就出現(xiàn)在補(bǔ)償欄中。


此時(shí),可點(diǎn)擊保存將此補(bǔ)償下來,以便下次使用?;氐絇age 1,當(dāng)添加一個(gè)未經(jīng)過補(bǔ)償調(diào)節(jié)的數(shù)據(jù)時(shí),將該補(bǔ)償拖過去,則該補(bǔ)償矩陣就被應(yīng)用到數(shù)據(jù)中。


或者通過右鍵-Format-Overlay-Compension將補(bǔ)償應(yīng)用到該數(shù)據(jù)中。如下圖所示:


2. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)


選擇右鍵-Statistics,可添加門數(shù)據(jù)及十字門象限數(shù)據(jù)。


本期就先介紹到這里,大家是不是對(duì)Denovo軟件有了更進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)?我們會(huì)陸續(xù)推出Denovo軟件的功能介紹及流式數(shù)據(jù)分析的技巧,感興趣的同學(xué)可以下載試用哦。

往期精彩回顧

Denovo FCS Express6使用指南-流式數(shù)據(jù)分析入門篇(上);

這個(gè)冬天,Denovo陪你處理流式數(shù)據(jù)。


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