隨著酶聯(lián)免疫分析技術(shù)在醫(yī)學(xué)及生物學(xué)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，體外檢測各種細胞因子及抗體研究有了新的突破。面對不同的實驗我們怎樣才能得到更好的實驗數(shù)據(jù)？今天我們就和大家說說ELISPOT基本知識及試劑盒選擇的幾個要素。

酶聯(lián)免疫斑點檢測（ELISPOT）是將細胞培養(yǎng)技術(shù)和ELISA技術(shù)相結(jié)合，可以原位地檢測培養(yǎng)細胞體外分泌蛋白的高靈敏分析技術(shù)。該技術(shù)集高靈敏度、高可信度、高通量、單細胞水平、功能性檢測與低成本等諸多優(yōu)點于一身。根據(jù)研究目的及檢測蛋白類型，可分為T細胞ELISPOT和B細胞ELISPOT兩種類型。其中T細胞ELISPOT主要用于檢測刺激后細胞所分泌的痕量細胞因子，而B細胞ELISPOT主要用于檢測抗體分泌B細胞的頻率。ELISPOT是用抗體或抗原捕獲培養(yǎng)細胞分泌的蛋白，并以酶聯(lián)斑點顯色的方法將其表現(xiàn)出來。

本文結(jié)合達優(yōu)^?預(yù)包被ELISPOT試劑盒，將T細胞ELISPOT檢測細胞因子的基本原理說明如下：

• 特異性單抗包被在培養(yǎng)孔底部，通過非特異性蛋白溶液封閉多余空白位點；
  

• 加入單個細胞懸液及刺激物培養(yǎng)，陽性細胞經(jīng)活化分泌細胞因子，細胞因子就近被特異性包被抗體捕獲；

• 移出細胞，板底留下細胞因子的“影像”；

• 加入酶標(biāo)記的檢測抗體，檢測抗體和 “影像”上的細胞因子結(jié)合，形成“抗體-抗原-抗體”夾心結(jié)構(gòu)；

• 加入顯色底物，在酶的催化分解下，生成不可溶的色素，沉淀在膜上，即形成斑點；斑點計數(shù)，結(jié)果分析。

ELISPOT試劑選擇三大要素

• 抗體對的特異性及親和性

ELISPOT檢測技術(shù)是通過兩種高親和力、高特異性的抗細胞因子單克隆抗體來檢測淋巴細胞分泌細胞因子情況的一種方法，對抗體對質(zhì)量和純度有著特殊的要求，因此勢必要選擇專業(yè)生產(chǎn)ELISPOT抗體對的公司。達優(yōu)^?系列預(yù)包被ELISPOT試劑盒根據(jù)不同檢測因子，從其中挑選最佳組合抗體對進行生產(chǎn)。

不同來源抗體對檢測效果對比圖

• 高效封閉系統(tǒng)的選擇

不同的檢測樣本在板孔培養(yǎng)過程中，受各種實驗條件影響，如果封閉不當(dāng)都可能產(chǎn)生非特異性顯色，導(dǎo)致非特異性斑點的產(chǎn)生或者背景顏色的加重。這將直接影響到最后結(jié)果的判斷分析。達優(yōu)^?系列產(chǎn)品通過大量實驗，對不同來源、不同配方封閉方法進行封閉效果的對比試驗，篩選出更高效的封閉系統(tǒng)，并將之運用到系列試劑盒產(chǎn)品中。

不同來源、配方封閉方案篩選對比圖    

• 酶聯(lián)信號放大系統(tǒng)的選擇

為實現(xiàn)ELISPOT檢測的高靈敏度，所用的信號放大系統(tǒng)——酶，要求純度高，催化反應(yīng)轉(zhuǎn)化率高、專一性強、性質(zhì)穩(wěn)定，制成的酶標(biāo)抗體也必須是性質(zhì)穩(wěn)定，且繼續(xù)保留活性部分和高效催化能力。對國際上不同公司開發(fā)的最新通用性高效酶標(biāo)抗體進行對比性篩選試驗，一直作為達優(yōu)^?系 列產(chǎn)品質(zhì)控及品質(zhì)升級的一項重要工作持續(xù)進行，其首要目的就是保持試劑盒采用最佳的酶聯(lián)信號放大系統(tǒng)，達到最佳檢測效果。

不同來源酶聯(lián)信號放大系統(tǒng)篩選效果對比圖

看到了這里，想必大家對ELISPOT試劑盒選擇有了一個初步的了解，是不是在默默的想小達君你不厚道呀，說了這么久，也不來點ELISPOT試劑盒看看·······

各位客官別急，小達君這就為你們奉上~~

達優(yōu)^? ELISPOT產(chǎn)品列表

達優(yōu)^? ELISPOT輔助試劑

達優(yōu)^? ELISPOT讀板服務(wù)

達優(yōu)^? ELISPOT檢測服務(wù)

其它說明

• ELISPOT的檢測服務(wù)為實驗上門服務(wù)，需要到客戶實驗室進行實驗，差旅費及食宿另行報價；

• 上述實驗操作所需試劑及耗材由實驗室自行準(zhǔn)備齊全，不在該服務(wù)報價中；

• 檢測方案及相關(guān)問題請具體咨詢；

• 報價具體費用明細最終詳見服務(wù)合同。