自噬通過溶酶體將胞漿物質降解，是維持恒定程序的基本要素。研究自噬潮（autophagicflux）的關鍵蛋白是LC3（微管相關蛋白1輕鏈3）。在分離膜形成時胞漿中的LC3被招募并進入自噬程序，此定位動作被視為自噬膜的特征，用以檢測自噬的生成和發展。由LC3B融合一個綠色熒光蛋白（GFP）和一個紅色熒光蛋白（RFP）組成的嵌合蛋白 ，是檢測自噬過程的簡單方法。自噬體的形成可被RFP-GFP-LC3標記，顯示RFP和GFP雙信號。與溶酶體融合后，酸性環境可顯著降低GFP信號，RFP信號卻保持穩定。隨著自噬研究熱度的不斷提高，自噬報告基因細胞作為自噬過程研究的工具越來越多的受到廣大科研工作者的關注。

InvivoGen對人上皮瘤細胞系Hela、鼠源巨噬細胞系RAW264.7和人源單細胞系THP-1進行基因改造，在人源或鼠源LC3的N末端融合兩個熒光蛋白，RFP（酸性穩定）和GFP（酸性敏感），得到了穩定表達RFP:GFP:LC3的報告基因細胞Hela-DiFluo^TMhLC3細胞、RAW-DiFluo^TMhLC3細胞和THP1-DiFluo^TMhLC3細胞。在這些報告基因細胞中，通過熒光顯微鏡檢測綠色GFP-LC3和（或）紅色RFP-LC3斑點的呈現狀態，實現RFP-GFP搭配實時監測自噬潮的功能。

在自噬的早期，RFP和GFP信號均可被探知，當進入自噬體和溶酶體融合程序，GFP熒光信號消失，只留下可視的RFP熒光信號。GFP-LC3/RFP-LC3陽性細胞和RFP-LC3陽性細胞的比例可用來評估自噬潮的階段。

Hela-DiFluo^TMhLC3細胞、RAW-DiFluo^TMhLC3細胞和THP1-DiFluo^TMhLC3細胞均有Zeocin^TM抗性。

△圖1. 在HeLa-DiFluo hLC3 cells中檢測熒光斑點

☆HeLa-Difluo?hLC3細胞被25μM rapamycin 單獨處理或25μM rapamycin和 500nM bafilomycin A1（抑制自噬體和溶酶體融合）聯合處理。孵育24小時，用2% PFA固定細胞，并用共聚焦顯微鏡分析結果。請注意在圖片viii中，黃色（自噬體）和紅色（自噬溶酶體）斑點均顯著提升，而圖片ix中的斑點幾乎均為黃色（自噬體）。

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InvivoGen 1977年成立于法國，是法國較早的生物科技公司。公司成立的初期階段主要提供細胞培養相關試劑，如抗支原體、細菌、真菌污染的抗生素以及基因篩選抗生素（Blasticidin, Puromycin, Hygromycin B, G418, Zeocin）。隨著天然免疫研究熱點的興起，InvivoGen于2000年開始致力于天然免疫相關產品的研發和生產，并成為全世界優質、專業的天然免疫相關產品生產商。InvivoGen為天然免疫研究提供一整套研究方案，包括不斷更新的模式識別受體（PRRs）激動劑和拮抗劑，PRRs報告基因細胞以及天然免疫信號通路的誘導劑和抑制劑等。

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